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Van Der Zee
et al
. (2002b) projetaram uma outra estratégia baseada
na técnica da PCR. Para isso desenharam um conjunto de iniciadores a
partir da sequência do gene que codifica o 16S rRNA, sendo possível
amplificação de um fragmento de 200 pb específico para as espécies do
gênero
Legionella
. Os produtos de PCR obtidos foram hibridados com
novas sondas: LSPP-B para discriminar o gênero
Legionella
e LPN-B
para discriminar
L. pneumophila
de outras espécies de
Legionella
(com a
excepçãode
L. londonensis
, que possui uma sequência idêntica à da sonda
de
L. pneumophila
). Atualmente, a amplificação do gene 16S rDNA está
facilitada com a presença de kits comerciais já padronizados e eficazes na
amplificação seletiva para
Legionella
. Além do rDNA, há um outro gene
que permite a identificação de
Legionella
, este gene codifica uma proteína
de superfíciedemembranade24kDa encontradas em linhagens virulentas
quepodemmultiplicar-sedentrodemacrófagosalveolares inibindoa fusão
lisossoma-fagossoma(LINDSAY
etal
.,1994).Estaproteínaécodificadapelo
genepotencializadorde infecçãodemacrófagos (mip), que foi sequenciado
em 1989 por Engelberg e colaboradores. O uso deste gene permitiu
técnicas demanipulação deDNA, incluindo a PCR, a ser aplicada para o
reconhecimentoda
L. pneumophila
,
L. bozemanii
e
L.micdadei
.Adetecção
de
Legionella
pela amplificação do gene mip foi adaptado para utilização
da técnica dePCR em tempoReal seguida por hibridização (Ballard
et al
.,
2000) e semhibridaçãoporRantakokko-Jalava e Jalava (2001), emostrou-
se eficazpara tal finalidade e especificidadepara
L. pneumophila.
O gene
rpoB
codifica a β-subunidade da RNA polimerase e também
tem sido utilizado como um instrumento de identificação de
Legionella
e de outras espécies bacterianas. O grupo de pesquisadores de Koa
et al
.
(2003), usouPCR-RFLP específicopara
Legionella
ePCR-RFLP específico
