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executados, comopor exemplo, a eficáciada extraçãodeDNA, daPCR e a
presençade inibidores da reação. Para controle positivopode ser utilizado
uma cultura de
Legionella
ou ainda, de maneira mais segura, é possível
utilizar umDNA lambda com sequências terminais complementares aos
iniciadores utilizados (JOLY
et al
., 2006).
As vantagensdemétodosbaseadosna técnicadaPCR em comparação
aos métodos dependentes de cultivo incluem sensibilidade, precisão e
avaliação rápida de contaminação de diferentes amostras. Entretanto, tem
sidodiscutidoque aprincipal desvantagemdesta estratégia éo fatodenão
fazer distinção entre as células viáveis e não viáveis (célulasmortas). Uma
novaabordagemparadetecçãodecélulasviáveispor corantes intercalantes
de DNA (Brometo de EtídioMonoAzide, EMA ou PropídioMonoazide,
PMA) em combinação comqPCR foi proposta nos últimos dez anos. Esta
técnicamolecular permite a amplificação deDNA alvo a partir de células
cultiváveis e viáveis, mas impede que a amplificação por PCR de DNA
a partir de células não viáveis. EMA liga seletivamente DNA em células
com membranas comprometidas, enquanto membrana celular intacta
representaumabarreiraparao corante.Umavezdentrodeuma célulanão
viável, ogrupo azidadoEMApermite a ligação cruzada comoDNA, após
aexposiçãoa forte luzvisível.A fotólisedaEMAconverteogrupoazidaem
um radical nitrenoaltamente reativoque se ligaDNA.Neste estado ligado,
oDNAnãopode seramplificadoporPCR, enquantoqueoDNAdecélulas
viáveis permanece não ligado às moléculas de EMA, e por conseguinte,
podem ser amplificados equantificados (MANSI
et al
., 2014).
Ainda assim, adetecçãode
Legionella
pelométodode cultivodeve ser
empregadaem todasasanálisesrealizadas.Hojeaconfirmaçãomaisprecisa
paraa identificaçãodacepaou serotipoérealizadapelo sequenciamentode
